Простатит – одно из наиболее распространенных урологических заболеваний, поражающее мужчин преимущественно репродуктивного возраста. Несмотря на многолетнюю историю изучения данной патологии, хронический бактериальный простатит (ХБП) остается загадкой для многих специалистов. Словно коварный противник, он скрывается под маской различных симптомов, периодически напоминая о себе неприятными обострениями, нарушающими качество жизни пациентов. Хронический рецидивирующий бактериальный простатит (ХРБП) представляет особый интерес, поскольку разгадка механизмов его периодического возвращения может стать ключом к эффективной терапии. В течение последних десятилетий понимание патогенеза простатита существенно трансформировалось – от упрощенной инфекционной модели к сложной многофакторной концепции, в которой иммунологические механизмы играют центральную роль. Исследование направлено на визуализацию и анализ этих невидимых невооруженным глазом иммунологических процессов, происходящих на клеточном уровне в секрете предстательной железы пациентов с ХРБП.
В современной урологической практике не вызывает сомнений тот факт, что ХБП является ведущей нозологией в структуре заболеваний мужской репродуктивной системы. Хотя данная патология не представляет непосредственной угрозы для жизни пациента, она существенно ухудшает ее качество, оказывая негативное влияние на семейные взаимоотношения, работоспособность и общее психоэмоциональное состояние мужчин.
На протяжении многих лет ведущей причиной развития простатита считалось наличие инфекционного агента в секрете предстательной железы (СПЖ), выявляемого бактериологическими методами исследования. Однако данная точка зрения претерпела значительные изменения. Сегодня ученые пришли к пониманию, что наличие микроорганизмов в СПЖ в любой степени контаминации является недостаточным условием для возникновения воспалительного процесса в предстательной железе. Современные исследования убедительно доказали, что биологические среды мочевыводящих путей и репродуктивных органов не являются стерильными в принципе. Для развития хронического бактериального простатита необходимо наличие тех или иных дополнительных факторов, которые определяют характер клинических проявлений, тяжесть течения и частоту рецидивирования заболевания.
В связи с этим на современном этапе изучения вопросов этиологии, патогенеза и диагностики простатита любого генеза патофизиология ХБП признается многогранной. Несмотря на то что постулируются некоторые доминирующие механизмы воздействия, такие как инфекционные, аутоиммунные, неврологические, эндокринные и психологические факторы, все они рассматриваются как части единого патологического процесса, а не как изолированные причины заболевания.
Интересно отметить, что согласно последним эпидемиологическим исследованиям, примерно 8-10% мужчин в мире в возрасте от 20 до 50 лет страдают от хронического простатита, причем рецидивирующие формы составляют более половины всех случаев. Прогрессирование заболевания может приводить к серьезным осложнениям, включая бесплодие и эректильную дисфункцию, что делает проблему ХРБП не только медицинской, но и социально-демографической.
Как известно, предстательная железа представляет собой многофункциональный орган мужской репродуктивной системы, при дисфункции которой запускается ряд метаболических процессов, генерирующих патологические состояния не только непосредственно в простате, но и в репродуктивной системе в целом. Исследования показывают, что железистый эпителий простаты участвует в синтезе простатспецифического антигена, кислой фосфатазы, цинка, лимонной кислоты и других биологически активных веществ, играющих важную роль в обеспечении фертильности и защите от патогенных микроорганизмов.
Кроме того, предстательная железа является иммунокомпетентным органом, в котором содержатся различные иммуноактивные клетки: лимфоциты, макрофаги, тучные клетки, дисфункция которых служит одним из патогенетических механизмов развития инфекционно-воспалительного процесса. Эти клетки образуют сложную сеть взаимодействий, регулирующих местный иммунитет и определяющих характер воспалительных реакций в ткани простаты.
Нарушения местного иммунитета пациентов с ХБП являются одной из важнейших причин рецидива заболевания и отсутствия эффективности проводимой антибактериальной терапии. Патология фагоцитоза и цитокиногенеза в СПЖ мужчин с инфекционно-воспалительными процессами в предстательной железе приводит к хронизации заболевания и возникновению ряда осложнений со стороны мочевыводящих путей и репродуктивных органов. Кроме того, иммунологические особенности местного иммунитета играют ключевую роль в препятствии персистенции микроорганизмов.
Дисфункция иммунной системы способствует в свою очередь изменению цитокинового профиля и формированию аутоиммунных процессов, что является также хорошей платформой хронизации инфекционно-воспалительного процесса в простате. Постоянное воздействие факторов патогенности микроорганизмов приводит к срыву защитных реакций, декомпенсации и нарушению функции предстательной железы.
Важно подчеркнуть, что предстательная железа имеет собственную иммунную систему, которая включает как клеточные, так и гуморальные компоненты. В нормальных условиях эта система поддерживает иммунологический гомеостаз и защищает орган от патогенных микроорганизмов. Однако при хронических воспалительных процессах происходит дисрегуляция иммунных механизмов, что приводит к персистенции инфекции и рецидивированию заболевания. Поэтому, несмотря на использование современных методов диагностики и строгое соблюдение стандартов обследования и лечения пациентов с ХБП, рекомендованных European Association of Urology (EAU) и Российским обществом урологов (РОУ), процент рецидива заболевания остается высоким. В связи с этим в настоящее время, особенно в эру антибиотикорезистентности, не вызывает сомнений необходимость применения специфических методов диагностики, позволяющих выявлять все звенья патогенеза.
Цель исследования: изучить иммунологические особенности секрета простаты пациентов с ХРБП методом электронной микроскопии. В его рамках был проведен анализ морфометрического эксперимента нейтрофилов в секрете предстательной железы 90 пациентов с хроническим бактериальным простатитом, разделенных на две группы. Первую (исследуемую) группу составил 51 пациент с хроническим рецидивирующим бактериальным простатитом (ХРБП), вторую (контрольную) – 39 пациентов с хроническим первично диагностированным бактериальным простатитом (ХПДБП).
Для проведения электронной микроскопии СПЖ фиксацию материала осуществляли в 2,5%-ном растворе глутарового альдегида (AppliChem, Германия) в 0,1 М фосфатном буфере (рН=7,2–7,4) в соотношении материал–фиксатор 1:20 в течение 2 ч при 4°С. После фиксации материал в объеме 1 мл помещали в пробирки и центрифугировали при 600 g в течение 10 мин, надосадочную жидкость удаляли, а осадок однократно отмывали в 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,2–7,4) путем ресупендирования.
После повторного центрифугирования проводили постфиксацию и контрастирование осадка 1%-ным раствором тетраоксида осмия (OsO4) (Acros Organics, Бельгия) в 0,1 М фосфатном буфере (рН=7,2–7,4) в течение 2 ч. Затем осадок обезвоживали в растворах этанола восходящей концентрации (50°, 60°, 70°, 80°, 96°, абсолютный этанол) по 20 мин при 4°С.
Готовили эпоксидную смолу следующего состава: 1,12 г EponTM 812 (Sigma-Aldrich, США), 0,6 г DDSA (Sigma-Aldrich, США), 0,65 г MNA (Sigma-Aldrich, США), 0,05 мл DPM-30 (Sigma-Aldrich, США). Данной смолой производили пропитывание образцов (смесь смолы и ацетона 1:3 – 2 ч, смесь смолы и ацетона 1:1 – 12 ч, смесь смолы и ацетона 3:1 – 2 ч, чистая смола – 2 ч) и последующую заливку в капсулы BEEM 1001B (Structure Probe, Inc., США). Полимеризацию смолы проводили в термостате при 28°С в течение 24 ч, затем при 60°С в течение 48 ч.
Из полученных блоков с образцами при помощи ультратома LKB-III 8800 (LKB Bromma, Швеция) изготавливали ультратонкие срезы толщиной 60–70 нм, которые монтировали на медные сеточки (Structure Probe, Inc., США) и контрастировали в 0,3%-ном водном растворе цитрата свинца (Sigma-Aldrich, США) с добавлением 0,01 М раствора гидроксида натрия.
После высушивания образцы исследовали методом трансмиссионной электронной микроскопии (ТЭМ) в микроскопе JEM-1011 (Jeol, Япония) при ускоряющем напряжении 80 кВ. Изображения получали при помощи CCD-камеры Olympus-SIS Veleta (Olympus Soft Imaging Solutions GmbH, Германия), с применением программного обеспечения Olympus iTEM TEM Imaging Platform (Olympus Soft Imaging Solutions GmbH, Германия). Все представленные ТЭМ-изображения являются репрезентативными для массы полученных изображений. Секрет простаты исследовался у каждого пациента трижды для обеспечения достоверности результатов и исключения случайных находок.
Необходимо отметить, что исследование было одобрено Локальным независимым этическим комитетом ФГБОУ ВО «РостГМУ» МЗ РФ от 05.10.2017, что подтверждает его соответствие этическим нормам проведения научных исследований с участием людей.
При проведении электронной микроскопии секрета предстательной железы у большинства пациентов первой группы (с ХРБП) цитологическая картина СПЖ была представлена преимущественно неактивными нейтрофилами с выраженным нарушением процесса фагоцитоза. Клетки имели правильную округлую форму, без псевдоподий, со светлой цитоплазмой, что свидетельствовало об их функциональной неактивности. В подавляющем большинстве случаев наблюдалось сочетание опустошенных гранул с отсутствием псевдоподий, что указывало на нарушение механизмов иммунного ответа на клеточном уровне.
В 100% наблюдений у пациентов первой группы присутствовали отчетливые признаки экзоцитоза и дегрануляции нейтрофилов, а также были отмечены значительные нарушения процесса опсонизации микроорганизмов. Несмотря на то что в секрете предстательной железы выявлялась активная миграция нейтрофилов, в основном регистрировались нейтрофилы с единичными псевдоподиями, которые не могли завершить процесс окружения и поглощения микроорганизма, хотя был активизирован процесс дезориентации микроорганизмов с выбросом активных нейтрализующих веществ вследствие экзоцитоза. Известно, что длительная незавершенная опсонизация способствует персистенции инфекционно-воспалительного процесса в предстательной железе с возможной последующей его активацией, что клинически характеризуется рецидивом заболевания.
При анализе данных электронной микроскопии СПЖ у пациентов второй группы (с ХПДБП) отмечалось наличие активных функционально нормальных нейтрофилов (лейкоцитов), характеризующихся неправильной формой и множественными псевдоподиями. У всех больных контрольной группы был сохранен нормальный процесс опсонизации микроорганизма, где дегрануляция сочеталась с наличием множества псевдоподиий, опсонирующих микроорганизмы в очаге инфекционно-воспалительного процесса предстательной железы.
Цитологическая картина секрета предстательной железы при хроническом первично диагностированном бактериальном простатите характеризовалась отсутствием нарушения местного иммунитета. Регистрировался нормальный процесс фагоцитоза, где множество псевдоподий сегментоядерного нейтрофила полностью завершали процесс опсонизации микроорганизмов в зоне воспалительного процесса.
Таким образом, проведенный анализ результатов электронной трансмиссионной микроскопии показал, что у пациентов с ХПДБП не выявлено данных за дисфункцию местного иммунитета, в то время как у пациентов с ХРБП обнаружены выраженные нарушения иммунологических механизмов на клеточном уровне.
Следует отметить, что трансмиссионная электронная микроскопия позволяет выявлять более тонкие нарушения в лейкоцитах секрета предстательной железы, анализ которых дает возможность дифференцировать активность и тяжесть инфекционно-воспалительного процесса предстательной железы, что имеет важное значение для определения тактики лечения и прогнозирования течения заболевания.
Нарушения иммунологических параметров секрета предстательной железы у пациентов с хроническим рецидивирующим бактериальным простатитом представляют собой благоприятную платформу для активации инфекционно-воспалительного процесса в простате. Полученные результаты электронной микроскопии убедительно доказывают, что у пациентов с ХРБП в СПЖ в подавляющем большинстве случаев регистрируются неактивные нейтрофилы в сочетании с небольшим удельным весом клеток лимфоцитарного звена, в отличие от пациентов с ХПДБП, у которых в секрете предстательной железы в 100% случаев обнаруживаются только активные нейтрофилы.
Полученные результаты соответствуют данным исследований, проведенных ранее, где у пациентов с РХБП в СПЖ при микроскопическом исследовании преобладали лимфоциты. Кроме того, в исследовании секрета предстательной железы у пациентов с ХРБП в большинстве случаев выявлена фагоцитарная недостаточность, свидетельствующая о декомпенсации её иммунной системы, особенно клеточных механизмов, что способствует персистенции инфекционно-воспалительного процесса. В отличие от этого, у пациентов с ХПДБП не было отмечено нарушений фагоцитоза, что указывает на сохранность иммунологических механизмов защиты.
Ранее в ряде проведенных исследований было отмечено, что в предстательной железе как при ХРБП, так и при абактериальном простатите выявлена экспрессия HLA DR, большого количества Т-лимфоцитов с преобладанием субпопуляций CD8+ над CD4+, повышенного количества антигенпрезентирующих клеток и тканевых макрофагов, отсутствие В-лимфоцитов. Эти данные свидетельствуют о том, что воспалительная реакция при хроническом простатите носит характер иммунной клеточной реакции, и полученные результаты электронной микроскопии подчеркивают важную роль клеточного иммунитета при ХРБП.
Современные исследования также демонстрируют, что нарушения в цитокиновом профиле играют существенную роль в патогенезе ХРБП. Повышенные уровни провоспалительных цитокинов, таких как интерлейкин-1 (IL-1), фактор некроза опухоли-альфа (TNF-α) и интерлейкин-6 (IL-6), обнаруживаются в секрете предстательной железы пациентов с ХРБП. Эти цитокины стимулируют выработку хемокинов, которые привлекают лейкоциты в очаг воспаления, но при длительном воздействии могут вызывать дисфункцию нейтрофилов и нарушать процессы фагоцитоза. Это согласуется с наблюдениями о наличии неактивных нейтрофилов в СПЖ пациентов с ХРБП.
Необходимо также учитывать роль оксидативного стресса в развитии хронического воспаления предстательной железы. Избыточное образование активных форм кислорода приводит к повреждению клеточных мембран и ДНК, что в свою очередь вызывает апоптоз иммунокомпетентных клеток и нарушает их функциональную активность. Это может объяснять обнаруженные изменения в морфологии и функции нейтрофилов у пациентов с ХРБП.
Таким образом, комплексная оценка иммунологических параметров секрета предстательной железы, включая электронно-микроскопическое исследование, позволяет не только уточнить патогенетические механизмы ХРБП, но и разработать персонализированные подходы к лечению данного заболевания с учетом выявленных нарушений местного иммунитета.
Выявленные иммунологические особенности секрета предстательной железы у пациентов с ХРБП имеют важное клиническое значение, поскольку позволяют обосновать необходимость включения в комплексную терапию хронического простатита препаратов, направленных на коррекцию местного иммунитета. Традиционная антибактериальная терапия, хотя и является основой лечения бактериального простатита, часто оказывается недостаточно эффективной у пациентов с рецидивирующими формами заболевания именно из-за наличия иммунологических нарушений, которые не устраняются антибиотиками.
На основании полученных данных можно рекомендовать проведение иммуномодулирующей терапии у пациентов с ХРБП с целью активации фагоцитарной активности нейтрофилов и нормализации процессов опсонизации микроорганизмов. Это может способствовать более эффективной элиминации возбудителя из ткани предстательной железы и предотвращению рецидивов заболевания.
Кроме того, электронная микроскопия секрета предстательной железы может быть рекомендована как дополнительный метод диагностики у пациентов с хроническим простатитом, особенно при рецидивирующем течении заболевания, поскольку позволяет выявить нарушения местного иммунитета на ранних стадиях и своевременно скорректировать терапию.
Важно отметить, что в современной клинической практике все большее значение приобретает персонализированный подход к лечению заболеваний, и хронический простатит не является исключением. Оценка иммунологического статуса секрета предстательной железы методом электронной микроскопии позволяет индивидуализировать терапию в зависимости от выявленных нарушений и тем самым повысить ее эффективность.
У пациентов с ХРБП в 100% наблюдений отмечена дисфункция иммунокомпетентных клеток предстательной железы, что служит весомым основанием для обязательного включения в комплексную терапию данного заболевания иммуноактивных препаратов. Мы стоим на пороге новой эры в лечении хронического простатита – эры персонализированной иммунотерапии, основанной на тщательном анализе иммунологических параметров каждого конкретного пациента.
Представьте будущее, где каждый случай хронического простатита рассматривается не просто как инфекционное заболевание, требующее антибиотикотерапии, а как уникальный иммунологический дисбаланс, требующий индивидуального подхода. Электронная микроскопия секрета предстательной железы – это окно в микромир иммунных процессов, происходящих в простате, позволяющее врачу разработать «иммунологический портрет» пациента и на его основе создать оптимальную схему лечения.
Нарушения иммунологических параметров секрета предстательной железы у пациентов с ХРБП не просто существуют – они диктуют необходимость кардинального пересмотра терапевтических стратегий. Это не дополнительная опция, а обязательное условие эффективного лечения, направленного на разрыв порочного круга рецидивирования. Включение в план лечения лекарственной терапии, направленной на активацию факторов местного иммунитета, должно стать золотым стандартом ведения пациентов с ХРБП.
Возможно, именно эта парадигма – рассмотрение простатита через призму иммунологических нарушений – станет тем прорывом, который позволит миллионам мужчин во всем мире наконец избавиться от этого изнуряющего заболевания и вернуться к полноценной жизни без страха очередного рецидива. И хотя путь к полному пониманию иммунологических механизмов хронического простатита еще предстоит пройти, данное исследование – это еще один шаг в направлении к созданию по-настоящему эффективных методов лечения данной патологии.
